Detección y cuantificación de virus dengue 2 en lisado celular y plasma de niños por qPCR en tiempo real usando un estuche comercial y el equipo EcoTM System-Illumina
Detección y cuantificación de virus dengue 2 en lisado celular y plasma de niños por qPCR en tiempo real usando un estuche comercial y el equipo EcoTM System-Illumina
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Métodos para diagnóstico de dengue virus (DENV) en zonas endémicas son altamente necesarios. Uno de ellos es la reacción en cadena de polimerasa en tiempo real (qPCR), método que permite además la cuantificación del genoma viral. Los estuches comerciales de qPCR para DENV son costosos y restringen su uso a un número pequeño de dispositivos de qPCR, limitando la aplicación de la técnica. Aquí se evaluó el desempeño de un estuche comercial de qPCR para la detección de DENV-2 en un dispositivo de qPCR (EcoTM System, Illumina) localmente disponible, no listado por el fabricante del estuche. Lisado de células VERO-76 y plasma de niños, ambos con infección confirmada por DENV-2, fueron evaluados. Como controles de especificidad, lisado celular y plasma de niños infectados con DENV-1, además de lisado no infectado, fueron también incluidos. Las reacciones fueron además evaluadas simultáneamente en un equipo Applied Biosystem 7300, uno de los recomendados por el fabricante del estuche. La curva estándar generada por el EcoTM fue robusta (R2= 0.99), con baja variabilidad en las réplicas (<10%). La eficiencia de la reacción fue buena (88.8%) y sólo hubo amplificación en los lisados y plasma de niños infectados con DENV-2. Hubo una fuerte correlación positiva (R2= 1.0, P=0.0028) entre el número de copias de ARN viral en las muestras detectadas por los dos dispositivos de qPCR usados. Así, el uso del estuche para detección de DENV-2 aquí probado puede extenderse al EcoTM de forma segura. Este trabajo fortalece la capacidad tecnológica para el estudio de DENV en un área endémica.
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